GmbH kaufen: dieser Schlüssel für mehr Erfolg ebenso viel und mehr der eigenen Künstlerbedarf – Für smarte Geschäftsinhaber

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gl = new Array(); pa = new Array(); gl[2] = ‚Handelsbücher > Ergänzende Vorschriften für Kapitalgesellschaften (Aktiengesellschaften, Kommanditgesellschaften auf Aktien weiterhin Gesellschaften mit beschränkter Haftung) sowie bestimmte Personenhandelsgesellschaften > Offenlegung. Prüfung …halber den Betreiber des Bundesanzeigers‘;
gl[1] = ‚Handelsbücher > Ergänzende Vorschriften für Kapitalgesellschaften (Aktiengesellschaften, Kommanditgesellschaften geöffnet Aktien und Gesellschaften mit beschränkter Haftung) sowie bestimmte Personenhandelsgesellschaften > Jahresabschluß der Kapitalgesellschaft und Lagebericht > Bilanz‘;
pa[‚HGB/267
= [‚HGB‘, 1, ‚§ 267Umschreibung der Größenklassen(1) Kleine Kapitalgesellschaften sind solche, die mindestens alle zwei der drei nachstehenden Merkmale nicht überschreiten:1. 6 000 000 Euro Bilanzsumme.2. 12 000 000 Euro Umsatzerlöse rein (…)‘];
pa[‚HGB/325‘] = [‚HGB‘, 2, ‚§ 325Offenlegung(1) ebendiese gesetzlichen Vertreter Voraussetzung; Kapitalgesellschaften haben zu Gunsten von die Gesellschaft folgende Unterlagen in Gummihals Sprache offenzulegen:1. den festgestellten oder gebilligten Jahreswende, den (…)‘];

(1) Die Geschäftsführer haben den Jahresabschluß und den Lagebericht unverzüglich nach der Aufstellung den Gesellschaftern zum Zwecke der Feststellung des Jahresabschlusses vorzulegen. Ist der Jahresabschluß durch einen Abschlußprüfer zu prüfen, so haben die Geschäftsführer ihn zusammen mit dem Lagebericht und dem Prüfungsbericht des Abschlußprüfers unverzüglich nach Eingang des Prüfungsberichts vorzulegen. Hat die Gesellschaft einen Aufsichtsrat, so ist dessen Bericht über das Ergebnis seiner Prüfung ebenfalls unverzüglich vorzulegen.

(2) Die Gesellschafter haben spätestens bis zum Ablauf der ersten acht Monate oder, wenn es sich um eine kleine Gesellschaft handelt (§ 267 Abs. 1 des Handelsgesetzbuchs), bis zum Ablauf der ersten elf Monate des Geschäftsjahrs über die Feststellung des Jahresabschlusses und über die Ergebnisverwendung zu beschließen. Der Gesellschaftsvertrag kann die Frist nicht verlängern. Auf den Jahresabschluß sind bei der Feststellung die für seine Aufstellung geltenden Vorschriften anzuwenden.

(3) Hat ein Abschlußprüfer den Jahresabschluß geprüft, so hat er auf Verlangen eines Gesellschafters an den Verhandlungen über die Feststellung des Jahresabschlusses teilzunehmen.

(4) Ist die Gesellschaft zur Aufstellung eines Konzernabschlusses und eines Konzernlageberichts verpflichtet, so sind die Absätze 1 bis 3 entsprechend anzuwenden. Das Gleiche gilt hinsichtlich eines Einzelabschlusses nach § 325 Abs. 2a des Handelsgesetzbuchs, wenn die Gesellschafter die Offenlegung eines solchen beschlossen haben.

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= new Array(); männlicher Elternteil = new Array(); gl[3] = ‚Rechtsverhältnisse dieser Gesellschaft und der Gesellschafter‘;
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= [‚AktG‘, 1, ‚§ 291Beherrschungsvertrag; Gewinnabführungsvertrag(1) Unternehmensverträge sind Verträge, durch die ‚ne Aktiengesellschaft oder KG auf Aktien ebendiese Leitung ihrer Gesellschaft einem anderen Unternehmung unterstellt (Beherrschungsvertrag) oder (…)‘];
pa[‚GmbHG/12‘] = [‚GmbHG‘, 2, ‚§ 12Bekanntmachungen dieser GesellschaftBestimmt das Regel oder der Gesellschaftsvertrag, dass von der Gesellschaft etwas bekannt zu machen ist, so erfolgt die Bekanntmachung informeller Mitarbeiter Bundesanzeiger (Gesellschaftsblatt). Daneben kann der (…)‘];
pa[‚GmbHG/28‘] = [‚GmbHG‘, 3, ‚§ 28Beschränkte Nachschusspflicht(1) Ist Die Nachschußpflicht auf verknüpfen bestimmten Betrag engstirnig, so finden, wenn im Gesellschaftsvertrag nicht ein anderes festgesetzt ist, im Zustand verzögerter Einzahlung von Seiten Nachschüssen die aufwärts die (…)‘];

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(1) Das zur Erhaltung des Stammkapitals erforderliche Vermögen der Gesellschaft darf an die Gesellschafter nicht ausgezahlt werden. Satz 1 gilt nicht bei Leistungen, die bei Bestehen eines Beherrschungs- oder Gewinnabführungsvertrags (§ 291 des Aktiengesetzes) erfolgen oder durch einen vollwertigen Gegenleistungs- oder Rückgewähranspruch gegen den Gesellschafter gedeckt sind. Satz 1 ist zudem nicht anzuwenden auf die Rückgewähr eines Gesellschafterdarlehens und Leistungen auf Forderungen aus Rechtshandlungen, die einem Gesellschafterdarlehen wirtschaftlich entsprechen.

(2) Eingezahlte Nachschüsse können, soweit sie nicht zur Deckung eines Verlustes am Stammkapital erforderlich sind, an die Gesellschafter zurückgezahlt werden. Die Zurückzahlung darf nicht vor Ablauf von drei Monaten erfolgen, nachdem der Rückzahlungsbeschluß nach § 12 bekanntgemacht ist. Im Fall des § 28 Abs. 2 ist die Zurückzahlung von Nachschüssen vor der Volleinzahlung des Stammkapitals unzulässig. Zurückgezahlte Nachschüsse gelten als nicht eingezogen.

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Qualitative identification of growth hormone-releasing hormones in human plasma by means of immunoaffinity purification and LC-HRMS/MS

Analytical and Bioanalytical Chemistry,
Feb 2016

Andre Knoop
The use of growth hormone-releasing hormones (GHRHs) is prohibited in sports according to the regulations of the World Anti-Doping Agency (WADA). The aim of the present study was to develop a method for the simultaneous detection of four different GHRHs and respective metabolites from human plasma by means of immunoaffinity purification and subsequent nano-ultrahigh performance liquid chromatography-high resolution/high accuracy (tandem) mass spectrometry.

The target analytes included Geref (Sermorelin), CJC-1293, CJC-1295, and Egrifta (Tesamorelin) as well as two metabolites of Geref and CJC-1293, which were captured from plasma samples using a polyclonal GHRH antibody in concert with protein A/G monolithic MSIA™ D.A.R.T.’S® (Disposable Automation Research Tips) prior to separation and detection.

The method was fully validated and found to be fit for purpose considering the parameters specificity, linearity, recovery (19–37 %), lower limit of detection (<50 pg/mL), imprecision (<20 %), and ion suppression/enhancement effects. The analytes’ stability and metabolism were elucidated using in vitro and in vivo approaches. EDTA blood samples were collected from rats 2, 4, and 8 h after intravenous administration of GHRH (one compound per test animal). All intact substances were detected for at least 4 h but no anticipated metabolite was confirmed in laboratory rodents’ samples; conversely, a Geref metabolite (GHRH3-29) was found in a human plasma sample collected after subcutaneous injection of the drug to a healthy male volunteer. The obtained results demonstrate that GHRHs are successfully detected in plasma using an immunoaffinity-mass spectrometry-based method, which can be applied to sports drug testing samples.

Further studies are however required and warranted to account for potential species-related differences in metabolism and elimination of the target analytes Graphical abstract GHRH immunoaffinity purification by means of anti-GHRH antibody coated protein A/G D.A.R.T.’S

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Qualitative identification of growth hormone-releasing hormones in human plasma by means of immunoaffinity purification and LC-HRMS/MS
Qualitative identif ication of growth hormone-releasing hormones in human plasma by means of immunoaffinity purification and LC-HRMS/MS

Andre Knoop 0 1 2
Andreas Thomas 0 1 2
Eric Fichant 0 1 2
Philippe Delahaut 0 1 2
Wilhelm Schänzer 0 1 2
Mario Thevis 0 1 2
0 European Monitoring Center for Emerging Doping Agents (EuMoCEDA) , Cologne/Bonn , Germany
1 Laboratoire d’Hormonologie, C.E.R. Groupe-Département Santé , Rue du Point du jour 8, 6900 Marloie , Belgium
2 Institute for Biochemistry-Center for Preventive Doping Research, German Sport University Cologne , Am Sportpark Müngersdorf 6, 50933 Cologne , Germany

The use of growth hormone-releasing hormones (GHRHs) is prohibited in sports according to the regulations of the World Anti-Doping Agency (WADA). The aim of the present study was to develop a method for the simultaneous detection of four different GHRHs and respective metabolites from human plasma by means of immunoaffinity purification and subsequent nano-ultrahigh per formance liquid chromatography-high resolution/high accuracy (tandem) mass spectrometry.

The target analytes included Geref ( S e r m o r e l i n ) , C J C – 1 2 9 3 , C J C – 1 2 9 5 , a n d E g r i f t a (Tesamorelin) as well as two metabolites of Geref and CJC1293, which were captured from plasma samples using a polyclonal GHRH antibody in concert with protein A/G monolithic MSIA™ D.A.R.T.’S® (Disposable Automation Research Tips) prior to separation and detection.

The method was fully validated and found to be fit for purpose considering the parameters specificity, linearity, recovery (19-37 %), lower limit of detection (<50 pg/mL), imprecision (<20 %), and ion suppression/enhancement effects. The analytes‘ stability and metabolism were elucidated using in vitro and in vivo approaches. EDTA blood samples were collected from rats 2, 4, and 8 h after intravenous administration of GHRH (one compound per test animal). All intact substances were detected for at least 4 h but no anticipated metabolite was confirmed in laboratory rodents‘ samples; conversely, a Geref metabolite (GHRH3-29) was found in a human plasma sample collected after subcutaneous injection of the drug to a healthy male volunteer. The obtained results demonstrate that GHRHs are successfully detected in plasma using an immunoaffinity-mass spectrometry-based method, which can be applied to sports drug testing samples.

Further studies are however required and warranted to account for potential species-related differences in metabolism and elimination of the target analytes

LC-HRMS/MS; GHRH; Immunoaffinity; Doping; MSIA™-Tips

Introduction

Growth hormone-releasing hormones (GHRHs) are
hypothalamic peptides stimulating the endogenous growth hormone
(GH) secretion which, in turn, can entail anabolic effects [

1

].
Due to their presumed performance enhancing effects for
athletes, the World Anti-Doping Agency (WADA) has banned
GH and its releasing factors such as GHRH and analogues
from sports [

2

]. As early as 1984, Ling et al. [

3

] recognized
that the human growth hormone-releasing factor (hGRF1-44
amide) can be degraded to hGRF1-29 amide (Sermorelin)
without decreasing its bioactivity to less than 50 %. Various
recombinant and synthetic analogues with reduced and also
modified amino acid sequences for better metabolic resistance
have been investigated, verifying their endocrine effects
[

4–11

].

These studies focused, among other aspects, on
identifying metabolic reactions and degradation processes of the
truncated and modified analogues of GHRH and
specifically determined the protective properties of the introduced
D-amino acid moieties against unspecific degradations of the
therapeutic peptides in plasma [7]. Further, different
confiscated products have corroborated suspicions of a growing
GHRH black market and illicit synthesis of analogue peptide
hormones. For instance, CJC-1295 ((D-Ala2, Gln8, Ala15,
Leu27)-GRF amide), an emerging drug candidate, was
identified in 2010 [12], and in 2014 the finding of a modified
analogue of human growth hormone-releasing hormone
(hGHRH1–44) was reported [13].

For sports drug testing purposes, the prediction and
characterization of the metabolic behavior of particularly
peptidederived substances as well as analytical approaches allowing
for appropriately sensitive detection methods are vital.
Therefore, four different peptidic compounds with
GHreleasing properties exhibiting molecular masses between
3355 and 5132 kDa were intravenously administered to rats,
and blood and plasma samples were collected.

In addition, a
healthy male volunteer received a single subcutaneous dose of
Sermorelin and EDTA blood specimens were sampled. All
specimens were subjected to established principles of
immunoaffinity purification [14–16] followed by nano-ultra high
performance liquid chromatography (UHPLC) coupled to
high resolution tandem mass spectrometry (HRMS/MS)
[17–20]. However, in the present approach, an alternative
methodology utilizing an immunoaffinity extraction protocol
based on pipette tips containing covalently immobilized
recombinant Protein A/G [21] combined with a polyclonal
anti-GHRH antibody was employed. Here, besides the
aforementioned intact peptidic substances, two synthetic
metabolites (degradation products) were included into the test
method. For Sermorelin, an in vitro-derived metabolite has been
described as originating from the loss of the N-terminal
TyrAla-residue due to cleavage by dipeptidyl peptidase-IV
(DPPIV) [

7

].

For CJC-1293, it was anticipated that N-terminal
Tyrresidue will also be enzymatically removed [

7, 22

].

Material and methods

Chemicals and materials

For all aqueous buffers and diluting steps, ultrapure water
obtained from a MilliQ device was used. Glacial acetic acid
was purchased from Merck (Darmstadt, Germany).
Phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4) tablets were
obtained from Sigma (Schnelldorf, Germany) and used for
preparation of PBS buffer according to the manufacturer’s
recommendations (one tablet dissolved in 200 mL of water).

The
Finnpipette™ Novus i Multichannel Electronic Pipette
(including adjustable pipetter stand) and the appropriate Protein
A/G MSIA™ D.A.R.T.’S® (96 tips) were obtained from
Thermo (San Diego, CA, USA).

Corresponding 96-well
plates (0.5 mL, polypropylene) were purchased from Agilent

Technologies (Waldbronn, Germany). GHRH primary
antibody (polyclonal; host, rabbit) was kindly provided from
C . E . R .

– G r o u p e L a b o r a t o r i e s ( M a r l o i e , B e l g i u m ) .
Commercially available pooled human plasma (Octaplas, for
intravenous infusion) was purchased from Octapharma
(Langenfeld, Germany). The internal standard (ISTD)
acetyl-(Tyr1, D-Arg2)-GRF1-29 amide and Tesamorelin
(Egrifta™) were obtained from Bachem (Bubendorf,
Switzerland). GHRH1-29 (hGRF, Geref, Sermorelin) was
p u r c h a s e d f r o m t h e B i o l o g i s c h – M e d i z i n i s c h e s
Forschungszentrums (Düsseldorf, Germany). CJC-1295
((DAla2, Gln8, Ala15, Leu27)-GRF amide) and CJC-1293
((DAla2)-GRF amide) were custom-synthesized by Centic
Biotec (Jena, Germany), and the metabolites of Sermorelin
(GRF3-29) and CJC-1293 ((D-Ala2)-GRF2-29 amide) were by
the Medizinisch-Naturwissenschaftliches Forschungszentrum
(Eberhard Karls University, Tübingen, Germany).

Liquid chromatography (LC)

LC separation was accomplished on an AQUITY nanoflow
UHPLC system from Waters (Milford, CT, USA) equipped
w i t h a Wa t e r s S y m m e t r y t r a p p i n g c o l u m n ( C 1 8 ,
180 μm × 20 mm, 5 μm particle size) and a New Objective
PicoChip Reprosil pur (C18, 75 μm, 100 mm, 3 μm particle
size) as analytical column and emitter. For gradient elution,
0.1 % formic acid was used as solvent A and acetonitrile
acidified with 0.1 % formic acid as solvent B. The trapping
of 1 μL of sample solution was performed using 1 % B for
3 min with a flow of 8 μL/min.

The gradient program for the
analytical run, conducted at a flow rate of 350 nL/min, started
with 1 % B, increasing to 60 % B within 20 min and to 80 % B
in 2 min. Subsequent re-equilibration at 1 % B was
accomplished within 8 min.

Mass spectrometry

For the mass spectrometric detection, a Q Exactive (Thermo,
Bremen, Germany) operating in positive ion mode equipped
with a nano electrospray ionization source (+ESI) was
employed. Ionization was accomplished at a transfer capillary
temperature of 150 °C and a spray voltage of 2 kV. Data was
generated in full scan mode (m/z 400–1500, resolution 35,000
full width at half maximum (FWHM)) and targeted selected
ion monitoring (tSIM, resolution 17,500 FWHM), which were
multiplexed four times and combined with an inclusion list
containing accurate m/z values of most abundant charge states
of all target peptides.

The isolation window of the quadrupole
was set to 3 m/z for the tSIM and 1.5 m/z for data-dependent
tandem mass spectrometry (ddMS2) experiments,
respectively. Accurate mass measurements (<5 ppm) were ensured
through calibration according to manufacturer’s
recommendations (calibration mixture of caffeine, tetrapeptide MRFA, and
Ultramark). The gas supply consisted of nitrogen produced by
a nitrogen generator (CMC Instruments GmbH, Eschborn,
Germany). Main mass spectrometric parameters and data of
the target analytes are shown in Table 1.

Sample preparation and purif ication-MSIA™-Tips

Sample aliquots of 100 μL of plasma were spiked with 1 μL
of ISTD [200 ng/mL] and diluted with 100 μL of PBS before
extraction. The multichannel pipette was equipped with up to
12 protein A/G MSIA™-Tips and up to 2000 cycles (one
cycle corresponding to one round of liquid aspiration and
ejection) were used for distinct sample preparation steps as
outlined in Table 2. First, tips were conditioned with PBS
before binding 10 μg of the polyclonal GHRH primary
antibody (5 μL [2 mg/mL] in 95 μL PBS) to the proteins A/G
immobilized on the monolithic adsorbent surface. After
washing with PBS to remove unbound antibody residues the target
analytes were extracted from plasma by antibody-antigen
complex formation prior to three consecutive washing steps
with PBS and water (Table 2). The peptides of interest were
eluted into LoBind tubes using 3 % of aqueous acetic acid and
the eluate was immediately used for injection into the
UHPLC-MS(/MS) system.

In Fig. 1, a schematic illustration
of the relevant principle steps of the MSIA™ purification is
presented.

Qualitative method validation

For qualitative result interpretation, the developed method
was validated for human plasma regarding the following
parameters: specificity, linearity, recovery, lower limit of
detection (LLOD), imprecision, and ion suppression/
enhancement effects.

In order to identify potential interfering signals and mean
background noise, ten blank plasma specimens (five female
and five male) from healthy volunteers without any known

Amino acid sequences and mass spectrometric parameters of target analytes
Amino acid sequence

YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSR-NH2 DAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSR-NH2

YdADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSR-NH2

dADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSR-NH2
medications were prepared as described above to ensure
specificity of signals at expected retention times (n = 5 + 5). For the
evaluation of the assay’s linearity, a mixture containing
reference standards of all target analytes was spiked at six
concentration levels (0, 0.

1, 0.2, 0.4, 1, 2, and 5 ng/mL of each
analyte) into blank plasma specimens, which were analyzed
as outlined above. The extraction recovery was determined by
using 12 plasma aliquots containing 1 ng/mL per analyte. The
first set of six samples was fortified before immunoaffinity
purification and the other six were spiked after workup and
immediately before LC-MS/MS analysis (n = 6 + 6).

The
LLOD was evaluated as the lowest content measurable via
signal-to-noise ratio (S/N) of >3 and therefore six biological
replicates were prepared and analyzed at the estimated LLOD
of 50 pg/mL. To calculate the method’s imprecision, six sample
replicates at three different concentrations (0.05, 1, and 5 ng/
mL) were analyzed (n = 3 × 6) as before. For reasons of matrix
effects and influences on ionization (ion suppression or
enhancement), peak areas of blank plasma aliquots spiked after
sample workup [0.5 ng/mL per analyte] were compared to
those of an analogously fortified neat solution (3 % acetic acid).

For the investigation of the metabolic fate of GHRHs, in vitro
experiments using fresh human plasma samples were
conducted, allowing to test for potential degradation products of
the studied substances. In accordance to earlier reported
methods [23], aliquots of human plasma samples were diluted
(1:1) with PBS [22] and spiked to 10 μg/mL with Sermorelin
or Tesamorelin, respectively. After incubation for 30, 60, 120,
and 240 min at 37 °C, samples were prepared and analyzed as
described elsewhere [20]. Simulating degradation processes
of exopeptidases, potential metabolites were considered by
eliminating up to three amino acids from both N- and
C-terminus. All samples were probed for the anticipated
metabolic products as well as for the corresponding intact drugs.

Monoisotopic
mass [Da]

Precursor
[m/z]

Predominant
charge state

Retention
time [min]
5+
5+
5+
5+
5+
7+

8
Elution
3 % acetic

acid
200
75
100

Administration studies

Rat administration studies

To probe for the in vivo metabolism of Sermorelin, CJC-1293,
CJC-1295, and Tesamorelin, 0.1 mg of each GHRH was
administered intravenously to three rats (Rattus norvegicus,
Wistar, 200–300 g bodyweight at dosing). Urine samples were
collected in a metabolic cage prior to and 6, 12, 24, and 30 h
after administration but not subjected to analysis in this study.
Blood was sampled at 2, 4, and 8 h after injection and
specimens were centrifuged at 13,000×g for 20 min to produce
serum or EDTA plasma, which was stored at −20 °C until
analysis. The animal studies were conducted with approval
of the respective ethical committee and the laboratory
followed the directive 2010/63/EU of the European parliament and
the council of 22 September 2010 on the protection of animals
used for scientific purposes.

Human urine and plasma samples

Complementary to the aforementioned rat elimination study, a
single dose of 500 μg of Geref (Sermorelin) (Hallandale
Pharmacy, FL, USA) was self-administered subcutaneously
by a healthy male volunteer (59 years, 78 kg) following the
provision of written consent. EDTA plasma samples were
collected 30, 90, and 270 min after dosing and the specimens
were stored at −20 °C until analysis.

Results and discussion

All of the herein investigated peptides represent substances
that are prohibited at all times according to regulations
established by the WADA [

2

]. To date, information
concerning their metabolism and potential windows of
detection in a doping control context has been scarce;
however, it is of utmost importance to allow for estimating
the fitness for purpose of currently employed sports drug
testing methods.

Qualitative method validation

Main test method validation results for qualitative
analytical purposes are summarized in Table 3.

All target peptides
were detected as 5-fold or 7-fold charged molecules and
corresponding ions were observed at m/z 672 for
Sermorelin and CJC-1293 (z = 5), at m/z 674 for
CJC1295 (z = 5), at m/z 697 for the ISTD (z = 5), and at m/z
734 for Tesamorelin (z = 7) as well as m/z 625 and 639
for the metabolites of Sermorelin (z = 5) and CJC-1293
(z = 5), respectively. The retention times of the analytes
varied from 19.35 to 19.78 as depicted in Figs. 2 and 4.

The specificity of the assay was demonstrated by the
absence of interfering signals in defined extracted ion
chromatograms of the analytes at expected retention times.
Within the employed working range (0.1–5 ng/mL), the
signal responses of all analytes proved linear with
coefficients of correlation greater or equal to 0.994. The sample
preparation protocol as well as analytical setup were found
to be compatible also with serum samples as assessed with
a separate calibration curve experiment yielding
coeffic i e n t s o f c o r r e l a t i o n ≥ 0 .

9 7 8 . A n a l y t e r e c o v e r i e s
concerning immunoaffinity purification were tested and
varied between 19 and 37 %. The estimated LLOD of
50 pg/mL was corroborated with appropriate signal
intensities and signal-to-noise ratios substantially greater than
3 for all target compounds as illustrated in Fig. 2. The
imprecision of the method was determined as the relative
standard deviation of the procedure for low [50 pg/mL],
medium [1 ng/mL], and high [5 ng/mL] concentrations
ranging from 3.

5 to 19.2 %. Comparative spiking
experiments between blank plasma samples and neat elution
buffer for matrix effects showed no ion suppressing effects
[24–26]. On the contrary, higher signal intensities were
observed for spiked plasma samples, an effect that was
attributed to reduced unspecific losses of the analytes
(e.g.

, on instrument or vial surfaces) in the presence of
co-extracted plasma proteins.
Identifying potential metabolites of Sermorelin and
Tesamorelin was accomplished by subtracting and comparing
mass spectrometric full scan data of samples prepared before
and after incubation of the substrates in fresh human plasma.
For Tesamorelin, no degradation products of considerable
abundance were detected, suggesting a substantial resistance
towards proteolytic activities in human plasma. Conversely, in
case of Sermorelin, the earlier reported metabolite (GRF3-29)
[

7

] was observed as a result of in vitro metabolic processes
and the amounts of the intact drug decreased continuously
with an increasing duration of incubation. After a period of
4 h, Sermorelin was entirely degraded from the spiked plasma
sample.

In vivo experiments

All intact GHRHs administered intravenously to rats were
detected in plasma samples collected 2 h post dosing. In
addition, Tesamorelin, CJC-1295, and CJC-1293 were also
identified in specimens sampled 4 and 8 h post-administrating
(Fig. 3), with the 8-h sample representing the latest collection
time point of the study. Here it appears noteworthy that only
qualitative results were obtained and that no pharmacokinetic
interpretation was conducted. While all analytes were
unequivocally identified and differentiated by mass
spectrometry, chromatographic separation was accomplished for all
target peptides with the exemption of the closely related
compounds Sermorelin and CJC-1293 under the chosen analytical
conditions.

Both Sermorelin and CJC-1293, which differ only
Parameter
LLOD [pg/mL]
Slope
Intercept
Coefficient of

correlation
Imprecision [%]
Recovery [%]

Main validation results for qualitative analysis of GHRHs in human plasma
Sermorelin / CJC-1293

CJC-1295

Tesamorelin
50 pg/mL
1 ng/mL
5 ng/mL
ƒFig. 2 Extracted ion chromatograms (targeted SIM experiments) of
[a] a metabolite of CJC-1293, [b] a metabolite of Geref/Sermorelin,
[c] the ISTD, [d] Geref/Sermorelin and CJC-1293, [e] Tesamorelin,
and [f] CJC-1295, all in human plasma. Corresponding high resolution
mass spectra of the protonated molecules [M+5H]5+ and [M+7H]7+,
respectively, are shown as insets. A spiked sample at the estimated
LLOD of 50 pg/mL is shown as top panel and a corresponding blank
plasma sample spiked with the ISTD only is presented below
by the substitution of l-alanine by d-alanine at position 2
(Table 1), were found to be readily biotransformed especially
when compared to CJC-1295. However, none of the
anticipated metabolic products such as N- or C-terminally truncated
analogues were detected, suggesting the rapid and unspecific
degradation of these compounds.

Compared to rat plasma samples collected after the
intravenous application of Sermorelin, the human in vivo study
(using subcutaneous drug application) indicates a different
but also rapid metabolism of the peptide hormone. While the
intact drug was not detected in any of the collected plasma
samples, the in vitro-derived Sermorelin metabolite GRF3-29
was detected in plasma 30 min post injection (Fig. 4). The
subsequently collected specimen sampled after 90 min
returned negative test results for the selected metabolite,
suggesting the need for further metabolic products to allow for
extended detection windows of the prohibited peptide
hormone. In addition to EDTA plasma, also serum samples were
collected at identical time points yielding comparable results
(data not shown), which corroborated the possibility of using
both matrices (i.

e., serum and plasma) for doping control
purposes.

In accordance to former GHRH pharmacokinetic studies
by Jetté et al. [

7

], comparable metabolic stabilities of
Sermorelin, CJC-1293, and CJC-1295 were observed. The
results of the present assay confirm that Sermorelin is
effectively metabolized and the GRF3-29 metabolite was found
instead of the active substance in case of subcutaneous
administration (to humans) as well as in vitro.

Because of their
DAla2 modification, no analogous metabolites of CJC-1293 and
Sermorelin (2 h post-administration) in rat plasma after intravenous
injection of 0.1 mg of the drug
CJC-1295 were observed. Here, the intact compounds were
detectable up to the latest sample collection time point and
proved significantly longer-lasting, suggesting to include the
administered substance in doping control analytical
approaches. Similarly, the mod ified GHRH analogue
Tesamorelin demonstrated considerable metabolic stability
that enabled its identification at all sampling points (i.e.

, up
to 8 h post-administration).

Conclusion

GHRHs are prohibited in elite sports at all times and,
consequently, test methods are required that enable
WADAaccredited laboratories to detect these analytes or respective
metabolic products in routine doping control samples. In the
light of the limited amount of information regarding the
in vivo degradation of the GHRH-derived compounds
Sermorelin, CJC-1293, CJC-1295, and Tesamorelin, both
in vitro simulation as well as animal and human in vivo studies
were conducted allowing to identify practical target analytes
(i.e., intact compounds and/or diagnostic metabolites) to
estimate detection windows and to establish and validate a test
method utilizing a semi-automatable immunoaffinity
purification (Protein A/G MSIA™ D.

A.R.T.’S®) approach followed
by UHPLC-HR-MS(/MS) analysis. The developed assay was
found to be fit for purpose, and the intact compounds and/or
metabolites were detected for up to 8 h in administration study
plasma samples.

In case of Sermorelin, the detection window
was limited to 2 h following a single dose application. These
results suggest follow-up studies potentially enabling the
male volunteer. Corresponding high-resolution mass spectra of the
protonated molecules [M+5H]5+ are shown as insets
identification of additional metabolites offering extended
detection windows.

Acknowledgments This project was supported in part by funding from
the Partnership for Clean Competition Research Collaborative (grant
#R314). The content of this publication does not necessarily reflect the
views or policies of the Research Collaborative.

Further support was
received from the World Anti-Doping Agency (grant #14D04MT) and
the Federal Ministry of the Interior of the Federal Republic of Germany
(Berlin, Germany). The authors also thank Dr. Ravindra Chaudhari and
Dr. Urban Kiernan (Thermo Fisher Scientific, Tempe, AZ) for providing
the Finnpipette™ Novus i Multichannel Electronic Pipette.
Compliance with ethical standards All studies involving human
participants were in accordance with the ethical standards of the institutional
and/or national research committee and with the 1964 Helsinki
declaration, its later amendments or comparable ethical standards, and written
informed consent was obtained.

Further, all applicable international,
national, and/or institutional guidelines for the care and use of animals were
followed.

Conflict of interest The authors have no conflicts of interest to declare.
Open Access This article is distributed under the terms of the
Creative Commons Attribution 4.0 International License (http://
creativecommons.org/licenses/by/4.

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dejure.org / Gesetze und Rechtsprechung – Verzahnter denn je – dejure.org

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Gesetzesstand: 18. Januar 2016
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    Das Sozialgericht Karlsruhe hat eine Berufsgenossenschaft verurteilt, den Sturz des Klägers – eines Gesellschafter-Geschäftsführers einer „Familien-GmbH“ – von einer Leiter als Arbeitsunfall anzuerkennen….
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  • Auch GmbH-Geschäftsführer kann sich bei Alters­diskriminierung auf Allgemeines Gleich­behandlungs­gesetz berufen

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Der Erfolg eines Künstlerbedarf ruhende gmbh kaufen Geschäfts hängt von vielen Faktoren ab und du findest im folgenden die wichtigsten Eckpfeiler. Herausgefiltert aus tausenden Geschäftsabläufen und kopiert von erfolgreichen Menschen:


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GmbH Gesetz: Künstlerbedarf – tml>

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An AGBGB zu § 36 – dejure.org
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gb=’AGBGB‘;
bez=’§‘;
norm_hier=’Anlage‘;
akt_gesetz=gb;
naechste_seite=’/gesetze/AGBGB‘;
vorherige_seite=’/gesetze/AGBGB/52.html‘;
nach=““; vor=““;
gl = new Array(); pa = new Array(); gl[1] = ‚Recht der Schuldverhältnisse > Einzelne Schuldverhältnisse > Gemeinschaft‘;
gl[2] = ‚Sachenrecht > Vorkaufsrecht‘;
pa[‚BGB/743‘] = [‚BGB‘, 1, ‚§ 743Früchteanteil; Gebrauchsbefugnis(1) Jedem Teilhaber gebührt ein seinem Anteil entsprechender Bruchteil der Früchte.(2) Jeder Teilhaber ist zum Gebrauch des gemeinschaftlichen Gegenstands insoweit befugt, als nicht der Mitgebrauch der (…)‘];
pa[‚BGB/744‘] = [‚BGB‘, 1, ‚§ 744Gemeinschaftliche Verwaltung(1) Die Verwaltung des gemeinschaftlichen Gegenstands steht den Teilhabern gemeinschaftlich zu.(2) Jeder Teilhaber ist berechtigt, die zur Erhaltung des Gegenstands notwendigen Maßregeln ohne Zustimmung der (…)‘];
pa[‚BGB/746‘] = [‚BGB‘, 1, ‚§ 746Wirkung gegen SondernachfolgerHaben die Teilhaber die Verwaltung und Benutzung des gemeinschaftlichen Gegenstands geregelt, so wirkt die getroffene Bestimmung auch für und gegen die Sondernachfolger.‘];
pa[‚BGB/1098‘] = [‚BGB‘, 2, ‚§ 1098Wirkung des Vorkaufsrechts(1) Das Rechtsverhältnis zwischen dem Berechtigten und dem Verpflichteten bestimmt sich nach den Vorschriften der §§ 463 bis 473. Das Vorkaufsrecht kann auch dann ausgeübt werden, wenn das Grundstück von dem (…)‘];
pa[‚BGB/748
= [‚BGB‘, 1, ‚§ 748Lasten- und KostentragungJeder Teilhaber ist den anderen Teilhabern gegenüber verpflichtet, die Lasten des gemeinschaftlichen Gegenstands sowie die Kosten der Erhaltung, der Verwaltung und einer gemeinschaftlichen Benutzung nach dem (…)‘];
pa[‚BGB/745‘] = [‚BGB‘, 1, ‚§ 745Verwaltung und Benutzung durch Beschluss(1) Durch Stimmenmehrheit kann eine der Beschaffenheit des gemeinschaftlichen Gegenstands entsprechende ordnungsmäßige Verwaltung und Benutzung beschlossen werden. Die Stimmenmehrheit ist nach der Größe der (…)‘];
pa[‚BGB/1102‘] = [‚BGB‘, 2, ‚§ 1102Befreiung des KäufersVerliert der Käufer oder sein Rechtsnachfolger infolge der Geltendmachung des Vorkaufsrechts das Eigentum, so wird der Käufer, soweit der von ihm geschuldete Kaufpreis noch nicht berichtigt ist, von seiner (…)‘];
pa[‚BGB/1096
= [‚BGB‘, 2, ‚§ 1096Erstreckung auf ZubehörDas Vorkaufsrecht kann auf das Zubehör erstreckt werden, das mit dem Grundstück verkauft wird. Im Zweifel ist anzunehmen, dass sich das Vorkaufsrecht auf dieses Zubehör erstrecken soll.‘];

Artikel 226 bis 231 des Württembergischen Ausführungsgesetzes zum Bürgerlichen Gesetzbuch und zu anderen Reichsjustizgesetzen vom 29. Dezember 1931 (Reg.Bl. S. 545), zuletzt geändert durch das Gesetz vom 5. Juni 1973 (Ges.Bl. S.165):

II. Stockwerkseigentum

Artikel 226 Rechte und Pflichten der Stockwerkseigentümer

(1) Die mit dem Sondereigentum an einzelnen Gebäudeteilen (Stockwerkseigentum) verbundene Gemeinschaft umfaßt im Zweifel die zum gemeinsamen Gebrauch bestimmten Bestandteile und Rechte.

(2) Der Anteil an den gemeinschaftlichen Rechten und Lasten bemißt sich, soweit nichts anderes bestimmt ist, nach dem Verhältnis des Werts der Stockwerksrechte.

(3) Auf das Gemeinschaftsverhältnis finden die §§ 743, 744, 745 Abs. 2 und 3, 746, 748 und auf die sonstigen Beziehungen unter den Stockwerkseigentümern die §§ 745 Abs. 2, 746 BGB entsprechende Anwendung. Im Falle des § 744 Abs. 2 zweiter Halbsatz ist jeder Teilhaber zur Sicherheitsleistung in Höhe des auf ihn entfallenden Anteils an den Kosten verpflichtet.

Artikel 227 Vereinigung von Stockwerksrechten

Beim Zusammentreffen mehrerer Stockwerksrechte in einer Hand vereinigen sich diese zu einem einheitlichen Recht unbeschadet der an den bisher getrennten Eigentumsrechten begründeten besonderen Rechte.

Artikel 228 Vorkaufsrecht

(1) Wird ein Stockwerkseigentum an andere Personen als an Ehegatten, Lebenspartner, Abkömmlinge, angenommene Kinder oder Mitstockwerkseigentümer verkauft, so sind die anderen Stockwerkseigentümer nach dem Verhältnis ihrer Stockwerksrechte zum Vorkauf berechtigt. Handelt es sich um eine Bruchteils- oder sonstige Gemeinschaft an einem Stockwerkseigentum, so steht das Vorkaufsrecht zunächst den Teilhabern an der Gemeinschaft zu.

(2) Auf das Vorkaufsrecht finden die Vorschriften der §§ 1096, 1098 bis 1102 BGB entsprechende Anwendung. Die Frist zur Ausübung des Vorkaufsrechts beträgt drei Wochen.

(3) Das Vorkaufsrecht erstreckt sich auch auf einen Verkauf im Weg der Zwangsversteigerung oder durch den Konkursverwalter. Im Falle der Zwangsversteigerung darf der Zuschlag nicht vor Ablauf der für die Ausübung des Vorkaufsrechts geltenden Frist erteilt werden, es sei denn, daß der Vorkaufsberechtigte sein Recht vorher ausgeübt oder dem Vollstreckungsgericht gegenüber erklärt hat, es nicht ausüben zu wollen.

(4) Das Vorkaufsrecht und die daraus sich ergebenden Befugnisse gehen auf den Rechtsnachfolger im Stockwerkseigentum über.

Artikel 229 Untergang des Gebäudes

Beim Untergang des Gebäudes verwandelt sich das bisherige Sondereigentum an den einzelnen Gebäudeteilen in Miteigentum an der Grundfläche. Dasselbe gilt bei teilweisem Untergang, sofern eine Wiederherstellung des früheren Zustandes untunlich ist.

Artikel 230 Voraussetzung der Aufhebung

Ein Stockwerkseigentümer kann die Aufhebung des Stockwerkseigentums verlangen, wenn die Verhältnisse in dem Gebäude so unhaltbar geworden sind, daß ihm die Weiterführung des Stockwerkseigentums nicht mehr zugemutet werden kann.

Artikel 231 Durchführung der Aufhebung

(1) Die Aufhebung des Stockwerkseigentums erfolgt durch Verkauf des ganzen Gebäudes im Wege der Zwangsversteigerung und durch Teilung des Erlöses im Verhältnis des Werts der Stockwerksrechte. Bei der Feststellung des geringsten Gebots sind außer den aus dem Versteigerungserlös zu entnehmenden Kosten des Verfahrens alle die einzelnen Stockwerksrechte belastenden Rechte zu berücksichtigen. In jedem Fall wird bei der Versteigerung nur ein Gebot zugelassen, durch das der amtliche Schätzungswert sämtlicher an dem Gebäude bestehender Stockwerksrechte gedeckt wird.

(2) Geht auf Grund einer Versteigerung das Eigentum an dem ganzen Gebäude auf einen Ersteher über, so verwandeln sich die bisher auf den einzelnen Stockwerksrechten ruhenden Hypotheken, Grundschulden, Rentenschulden, Reallasten, Nießbrauchs- und Vorkaufsrechte in solche Rechte an einem dem Wertverhältnis der belasteten Stockwerksrechte entsprechenden Bruchteil des Eigentums am ganzen Grundstück.

(3) Das Wertverhältnis der bisherigen Stockwerksrechte für die Fälle des Absatzes 1 Satz 1 und des Absatzes 2 ist im Zwangsversteigerungsverfahren durch einen vor dem Versteigerungstermin den Beteiligten zuzustellenden Beschluß festzustellen. Der Beschluß unterliegt der Anfechtung, die sich nach den Vorschriften des Zwangsversteigerungsverfahrens bestimmt.

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    14 EEWärmeG – dejure.org

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    gb=’EEWaermeG‘;
    bez=’§‘;
    norm_hier=’14‘;
    akt_gesetz=gb;
    naechste_seite=’/gesetze/EEWaermeG/15.html‘;
    vorherige_seite=’/gesetze/EEWaermeG/13.html‘;
    nach=
    ; vor=““;

    = new Array(); pa = new Array(); gl[1] = ‚Nutzung Erneuerbarer Energien‘;
    gl[2] = ‚Finanzielle Förderung‘;
    pa[‚EEWaermeG/13‘] = [‚EEWaermeG‘, 2, ‚§ 13FördermittelDie Nutzung Erneuerbarer Energien für die Erzeugung von Wärme oder Kälte wird durch den Bund bedarfsgerecht in den Jahren 2009 bis 2012 mit bis zu 500 Millionen Euro pro Jahr gefördert. Einzelheiten werden (…)‘];
    pa[‚EEWaermeG/3
    = [‚EEWaermeG‘, 1, ‚§ 3Nutzungspflicht(1) Die Eigentümer von Gebäuden nach § 4, die neu errichtet werden, müssen den Wärme- und Kälteenergiebedarf durch die anteilige Nutzung von Erneuerbaren Energien nach Maßgabe der §§ 5 und 6 decken. Satz 1 (…)‘];

    />

    (1) Gefördert werden können Maßnahmen für die Erzeugung von Wärme oder Kälte, insbesondere die Errichtung oder Erweiterung von

    1. solarthermischen Anlagen,
    2. Anlagen zur Nutzung von Biomasse,
    3. Anlagen zur Nutzung von Geothermie und Umweltwärme sowie
    4. Wärmenetzen, Speichern und Übergabestationen für Wärmenutzer, wenn sie auch aus Anlagen nach den Nummern 1 bis 3 gespeist werden.

    (2) Vorbehaltlich weitergehender Anforderungen an die Förderung in den Verwaltungsvorschriften nach § 13 Satz 2 sind

    1. solarthermische Anlagen mit Flüssigkeiten als Wärmeträger nur förderfähig, wenn sie mit dem europäischen Prüfzeichen „Solar Keymark“ zertifiziert sind. Die Zertifizierung muss nach DIN EN 12975-1 (2006-06), 12975-2 (2006-06), 12976-1 (2006-04) und 12976-2 (2006-04) erfolgen2),
    2. Anlagen zur Nutzung von fester Biomasse nur förderfähig, wenn der Umwandlungswirkungsgrad mindestens folgende Werte erreicht:
    a) 89 Prozent bei Anlagen zur Heizung oder Warmwasserbereitung, die der Erfüllung der Pflicht nach § 3 Absatz 1 oder 2 dienen,
    b) 85 Prozent bei Anlagen zur Heizung oder Warmwasserbereitung, die nicht der Erfüllung der Pflicht nach § 3 Absatz 1 oder 2 dienen, und
    c) 70 Prozent bei Anlagen, die nicht der Heizung oder Warmwasserbereitung dienen.
    Der Umwandlungswirkungsgrad ist im Falle von Biomassekesseln der nach DIN EN 303-5 (1999-06) ermittelte Kesselwirkungsgrad, im Falle von Biomasseöfen der nach DIN EN 14785 (2006-09) ermittelte feuerungstechnische Wirkungsgrad und in den übrigen Fällen der nach den anerkannten Regeln der Technik berechnete Wirkungsgrad. Die Verwaltungsvorschriften nach § 13 Satz 2 können abweichend von Satz 1 Buchstabe b für die dort genannten Anlagen auch einen niedrigeren Mindestumwandlungswirkungsgrad festlegen, wenn diese Anlagen besondere Umweltanforderungen erfüllen,
    3. Wärmepumpen zur Nutzung von Geothermie, Umweltwärme oder Abwärme nur förderfähig, wenn sie mit einem der folgenden Zeichen ausgezeichnet sind:
    a) dem gemeinschaftlichen Umweltzeichen „Euroblume“3),
    b) dem Umweltzeichen „Blauer Engel“4) oder
    c) dem Prüfzeichen „European Quality Label for Heat Pumps“ (Version 1.3)5).
    Die Verwaltungsvorschriften nach § 13 Satz 2 können abweichend von Satz 1 für die dort genannten Zeichen festlegen, dass die Zeichen im Falle von Änderungen ihrer Vergabegrundlagen nach diesen neuen Vergabegrundlagen vergeben worden sein müssen. Die Verwaltungsvorschriften können abweichend von Satz 1 ferner festlegen, dass Wärmepumpen auch förderfähig sind, wenn sie Anforderungen nach anderen europäischen oder gemeinschaftlichen Normen erfüllen, sofern diese den Anforderungen an die Vergabe der Zeichen nach Satz 1 entsprechen.

    2) Amtlicher Hinweis: Alle zitierten DIN-Normen sind im Beuth Verlag GmbH, Berlin und Köln, veröffentlicht und beim Deutschen Patent- und Markenamt in München archiviert.

    3) Amtlicher Hinweis: Das gemeinschaftliche Umweltzeichen „Euroblume“ wird vergeben nach der Entscheidung 2007/742/EG der Kommission vom 9. November 2007 zur Festlegung der Umweltkriterien für die Vergabe des EG-Umweltzeichens an Elektro-, Gasmotor- oder Gasabsorptionswärmepumpen (ABl. L 301 vom 20.11 2007, S. 14).

    4) Amtlicher Hinweis: Das Umweltzeichen „Blauer Engel“ wird vergeben nach den Vergabegrundlagen RAL-UZ 118 „Energiesparende Wärmepumpen nach dem Absorptionsprinzip, dem Adsorptionsprinzip oder mit verbrennungsmotorisch angetriebenen Verdichtern“ (2008-03) und RAL-UZ 121 „Energiesparende Wärmepumpen mit elektrisch angetriebenen Verdichtern“ (2008-05). Die Vergabegrundlagen können bei dem RAL Deutschen Institut für Gütesicherung und Kennzeichnung e. V., Sankt Augustin, bezogen werden.

    5) Amtlicher Hinweis: Das Prüfzeichen „European Quality Label for Heat Pumps“ wird vergeben nach den Vergabegrundlagen der „European Heat Pump Association“ (EHPA) für Wärmepumpen mit Direktverdampfung des Kältemittels (Version 1.3, 2009-02), für Wasser/Wasser- und Sole/Wasser-Wärmepumpen (Version 1.3, 2010-02) sowie für Luft/Wasser-Wärmepumpen (Version 1.3, 2010-02). Die Vergabegrundlagen können bei dem EHPA, Rue d’Arlon 63-67, B-1040 Brüssel oder über die Internetseite www.ehpa.org bezogen werden.

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      • E-Zigaretten in nordrhein-westfälischen Gaststätten zulässig

        Nicht­raucher­schutz­gesetz dient allein dem Schutz vor Gefahren des Passivrauchens
        Gastwirte sind nach dem nordrhein-westfälischen Nicht­raucher­schutz­gesetz nicht verpflichtet, den Gebrauch sogenannter E-Zigaretten in ihren Betrieben zu unterbinden. Dies entschied…
        Lesen Sie mehr

      • E-Zigaretten in Gaststätten erlaubt

        Gebrauch von E-Zigaretten fällt nicht unter das Nicht­raucher­schutz­gesetz
        Das Verwaltungsgericht Köln hat entschieden, dass ein Gaststättenbesitzer seinen Gästen nicht den Konsum von E-Zigaretten untersagen muss. Die Auffassung der Stadt, dass der Gebrauch von E-Zigaretten…
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      • Rauchverbot für Rauchervereine und Raucherclubs verfassungsgemäß

        Im Gesundheitsschutzgesetzes verankertes striktes Rauchverbot für Gaststätten und Vereinsräumlichkeiten nicht zu beanstanden
        Der Bayerische Verfassungsgerichtshof hat entschieden, dass es verfassungsrechtlich nicht zu beanstanden ist, dass das gesetzliche Rauchverbot in Gaststätten und Vereinsräumlichkeiten auch für Rauchervereine…
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      Gesetzesstand: 18. Januar 2016

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        gmbh mantel kaufen vorteile: Du kannst über Geldprobleme lachen, wenn du diesen Plan befolgst.

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        GmbH Gesetz: Lieferservice –

        § 17

        (1) Bei Reallasten, Hypotheken, Grundschulden und Rentenschulden sind die in das Grundbuch einzutragenden Geldbeträge (§ 1107, § 1115 Abs. 1, § 1190 Abs. 1, §§ 1192, 1199 des Bürgerlichen Gesetzbuchs) in den Vermerken über die Eintragung des Rechts mit Buchstaben zu schreiben. Das gleiche gilt für die Eintragung einer Veränderung oder einer Löschung bezüglich eines Teilbetrags eines Rechts sowie im Falle des § 882 des Bürgerlichen Gesetzbuchs für die Eintragung des Höchstbetrags des Wertersatzes.

        (2) Wird in der zweiten oder dritten Abteilung eine Eintragung ganz gelöscht, so ist sie rot zu unterstreichen. Dasselbe gilt für Vermerke, die ausschließlich die gelöschte Eintragung betreffen. Die rote Unterstreichung kann dadurch ersetzt werden, daß über der ersten und unter der letzten Zeile der Eintragung oder des Vermerks ein waagerechter roter Strich gezogen wird und beide Striche durch einen von oben links nach unten rechts verlaufenden roten Schrägstrich verbunden werden; erstreckt sich eine Eintragung oder ein Vermerk auf mehr als eine Seite, so ist auf jeder Seite entsprechend zu verfahren. Im Falle der Löschung eines Erbbaurechts unter gleichzeitiger Eintragung der in § 31 Abs. 4 Satz 3 des Erbbaurechtsgesetzes bezeichneten Vormerkung ist auf diese im Löschungsvermerk hinzuweisen.

        (3) Wird in der zweiten oder dritten Abteilung ein Vermerk über eine Veränderung eingetragen, nach dessen aus dem Grundbuch ersichtlichen Inhalt ein früher eingetragener Vermerk ganz oder teilweise gegenstandslos wird, so ist der frühere Vermerk insoweit rot zu unterstreichen. Wird der früher eingetragene Vermerk ganz gegenstandslos, so gilt Absatz 2 Satz 3 entsprechend.

        (4) Bei Teilabtretungen und sonstigen Teilungen der in der dritten Abteilung eingetragenen Rechte ist der in Spalte 5 einzutragenden Nummer eine Nummer entsprechend dem Beispiel 1 in DIN 1421, Ausgabe Januar 1983*, hinzuzufügen.

        (5) Wird eine Hypothek, Grundschuld oder Rentenschuld teilweise gelöscht, so ist in der Spalte 3 der dritten Abteilung der gelöschte Teil von dem Betrag abzuschreiben. Bezieht sich diese Löschung auf einen Teilbetrag (Absatz 4), so ist der gelöschte Teil auch in Spalte 6 von dem Teilbetrag abzuschreiben.

        Amtliche Anmerkung:

        * Zu beziehen bei Beuth Verlag GmbH, Berlin, und archivmäßig niedergelegt bei der Deutschen Nationalbibliothek.

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          • BAG zur ordnungsgemäßen Unterrichtung bei einem Betriebsteilübergang

            Der Betriebsveräußerer oder der Erwerber muss gem. § 613 a Abs. 5 BGB im Falle eines Betriebsübergangs auch über die Identität des Betriebserwerbers informieren. Eine nicht den gesetzlichen Vorgaben…
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